測(cè)定意義：GSH/GSSG是細(xì)胞內(nèi)重要的氧化還原對(duì)之一。因此，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)，也是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的主要指標(biāo)之一。

測(cè)定原理：利用2-VP法測(cè)GSSG含量。

需要的儀器，耗材:低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。


樣本處理

（1）組織處理 新鮮組織首先用 PBS 沖洗 2 次，然后稱取動(dòng)物組織或者植物組織 0.1g。加入用試劑一潤洗過的勻漿器中（勻 漿器提前放冰上預(yù)冷）；然后加入 1mL 試劑一（組織/試劑一比例保持不變即可），迅速冰上充分研磨（使用液氮 研磨效果更好）；8000g，4℃離心 10min；取上清液放置于 4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存（可保 存 10 天）。


（2）血液處理 血漿：將收集的抗凝血于 4℃，600g 離心 10 分鐘，吸取上層血漿到另一支試管中，加入等體積的試劑一，4℃， 8000g 離心 10 分鐘，將上清移入新的試管中放置于 4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存（可保存 10 天）。 血細(xì)胞：將收集的抗凝血于 4℃，600g 離心 10 分鐘，棄去上層血漿用 3 倍體積的 PBS 清洗 3 次（用 PBS 重懸血 細(xì)胞，600g 離心 10 分鐘），加入等體積試劑一，混勻后 4℃放置 10 分鐘，8000g 離心 10 分鐘，吸取上清放于 4℃ 待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存（可保存 10 天）。

（3）細(xì)胞處理 收集不少于 10 6個(gè)細(xì)胞，首先用 PBS 清洗細(xì)胞 2 次（PBS 重懸細(xì)胞，600g 離心 10 分鐘），加入 3 倍細(xì)胞沉淀 體積的試劑一重懸細(xì)胞，反復(fù)凍融 2-3 次（可在液氮中凍結(jié)，37℃水浴中溶解），8000g 離心 10 分鐘，收集上清于 4℃待測(cè)，若暫時(shí)不能完成測(cè)試可放于-80℃保存（可保存 10 天）。